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当前位置:小木虫 >> 生物科学 >> [求助] PCR产物电泳时,目的条带很弱,加样孔附近却有非常亮的条带,为什么呢?

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[求助] PCR产物电泳时,目的条带很弱,加样孔附近却有非常亮的条带,为什么呢?


作者: wonwin29    发布日期: 2008-03-15

PCR产物电泳时,目的条带很弱,加样孔附近却有非常亮的条带,为什么呢?
怎么避免?大虾指教.

[ Last edited by johnsooh on 2007-7-17 at 18:41 ]
相关回复:

作者: asr   发布日期: 2007-01-26
目的条带很弱因为量不够.

加样孔附近有非常亮的条带,可能是你的产物中Pr含量太高.

作者: eleenjane   发布日期: 2007-01-26
哦,受教受教啊!

作者: 克隆大虾   发布日期: 2007-01-27
估计taq酶加多了

作者: wonwin29   发布日期: 2007-01-29
primer过量,不是应该生成二聚体,跑在最前面吗?怎么会在加样空附近呢?
Taq加多了,怎么会在加样空附近有非常亮的条带呢? 请教?

作者: wwwkkk83   发布日期: 2007-01-29
Pr含量 应该是 蛋白质含量     (不是 primer )
加样孔附近却有非常亮的条带
蛋白杂质移动很慢 常常在加样孔附近

作者: asr   发布日期: 2007-01-29
DNA在加样孔里跑不出去,
是因为它带负电荷,与带正电的蛋白质结合.
所以会出现滞留现象.

作者: arclu   发布日期: 2007-01-30
估计是没有跑出去
原因:蛋白与DNA的结合、酶混杂、酶切条件不合适、有外切核酸酶的污染....

作者: XJYCY   发布日期: 2007-02-02
有可能是你的上样缓冲液中的蔗糖浓度过大,还有就是DNA提取时蛋白没有提干净,如果是银染就会在上样孔处出现发黑的条带.

作者: arpe0620   发布日期: 2007-02-07
目的条带很弱,说明
P出来了一些,
加样孔附近却有非常亮的条带可能是蛋白也可能是你的引物不好,P出了好多非目标片段!

作者: hotdunk   发布日期: 2007-02-07
蛋白是正解~:D

作者: wanglei_ibcas   发布日期: 2007-02-26
长见识了,以前在作试验的时候曾经遇到这样的问题,当时没有想通,也没有怎么用心去思考,今天学习了,谢谢!!!!

作者: gyhit   发布日期: 2007-02-26
还是把你的图贴出来让大家看看再做定论吧!这样干说太没底了!

作者: ilovejim   发布日期: 2007-02-27
QUOTE:
Originally posted by gyhit at 2007-2-26 17:02:
还是把你的图贴出来让大家看看再做定论吧!这样干说太没底了!
好主意

作者: cyhcaicainiao   发布日期: 2007-03-21
模板不纯吧???

作者: minimaochong   发布日期: 2007-03-27
前几次做PCR扩增大小分别为1300,1600,1800的片段都做出来了,但这次只有1300的片段扩增出来了,1600及1800的未扩增出来(同一次PCR)请高人帮忙分析一下是什么原因,如何验证呢?

作者: ldxmhyq   发布日期: 2007-03-27
:rol::rol:

作者: sg1150cn   发布日期: 2007-03-29
要么是引物质量不好,加样孔是剩余的基因组;要么是你的dNTP被污染了。

作者: sky_bolt   发布日期: 2007-03-31
一:DNA过量
二:多糖污染

作者: ntu-knight   发布日期: 2007-04-07
会不会是基因组DNA污染啊?

作者: joamitith   发布日期: 2007-04-26
模板DNA溶液中蛋白质杂质较多。做PCR前应尽量去除,比如苯酚氯仿抽提干净些,或者抽提前用蛋白酶作用。

作者: 刘玉   发布日期: 2007-06-04
这样的问题我也遇见过,从经验来看。可能是扩增出来的DNA缠绕成团了。电泳前轻轻振荡均匀即可。

作者: shichunw9127   发布日期: 2007-07-05
我也遇过胶孔亮的问题,估计是点样问题:)

作者: 一点通   发布日期: 2007-07-08
估计电泳梳有污染物存在

作者: fqj   发布日期: 2007-07-08
楼主辛苦了

作者: 战狼   发布日期: 2007-07-08
rTaq酶加多了,或者你的模板蛋白多

作者: lsbrc   发布日期: 2007-07-10
1.PCR的模板如果是基因组DNA,那么加样孔附近的条带可能是基因组DNA;
2.Taq酶过多的话,也会造成这种情况。

你可以在loading buffer中加入0。1% SDS,可以有效避免这种情况。

作者: lw0105jay   发布日期: 2007-07-10
如果是PCR产物点样孔附近有较亮的条带,最有可能是蛋白;
如果是从细胞中提纯的DNA电泳也有这样的现象,也有可能是基因组DNA.

[ Last edited by lw0105jay on 2007-7-11 at 01:33 ]

作者: dongzw   发布日期: 2007-07-16
偶也遇到过类似问题
学习了哦

作者: dongzw   发布日期: 2007-07-16
QUOTE:
Originally posted by lsbrc at 2007-7-10 11:59 PM:
1.PCR的模板如果是基因组DNA,那么加样孔附近的条带可能是基因组DNA;
2.Taq酶过多的话,也会造成这种情况。

你可以在loading buffer中加入0。1% SDS,可以有效避免这种情况。
感觉有道理.
不过, PCR的模板如果是基因组DNA;
加的模板的量一般都是很少的,偶觉得一般不会出现很亮的带...
个人之见

作者: ice1126   发布日期: 2007-10-10
如果是较大片段的模板,减少模板DNA的量,其它体系及参数没问题就能出结果,听我的没错!

作者: xtmgah31   发布日期: 2007-10-13
可能你在提取DNA时有很多蛋白质没有除去,会残留在加样孔附近,目得条带弱可能是目的DNA浓度低或是提取DNA过程中操作过于剧烈将其打断,没有得到完整的DNA

作者: yangym1123   发布日期: 2007-10-13
有过类似情况,觉得是PCR的条件有问题!

作者: matthew956   发布日期: 2007-11-16
原来是这样,估计昨天出现过亮的不正常条带,是因为PRIMER加多了,谢谢了

作者: hn_zht   发布日期: 2007-11-16
加样孔里的亮点是蛋白,条带若说明你的条件不是很好

作者: 狄林   发布日期: 2007-12-07
测一下260nm和230nm处样品的OD值的比,260nm和280nm处的OD比值,如果前者>=2,后者>=1.8,表示样品RNA除净,蛋白质含量不超过0.3%.
你的样品的的杂质含量估计比较高,最好重新提纯.

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