我在DNA提取过程中，在加入酚：氯仿：异戊醇（25：24：1）后离心总是出现混浊，离不下去，那位高手知道是怎么回事啊？

[ Last edited by telomerase on 2007-11-13 at 11:32 ]

可能是你的样品有其它杂质。

试剂的问题？

请问你从什么材料中提取DNA? 这是因为不同材料含有的杂质不一样，因此才能给予你适当的解决办法。另外建议 你不凡把你的提取方案告诉大家，这样才有针对性的给予你的具体解决办法。

我是用梨叶片做的，试剂没有问题，因为不是每个都出不来，是部分样品混浊，我用的CTAB提取法，方案就是先用液氮研磨叶片，加入预热的CTAB提取液2mL，混匀，65℃温浴30min，冷却至室温，5300rpm离心15min

我也碰到过这种情况，原因说不清。把转速提高些试试（10000-12000rpm，10min），好象有点效果。

我觉得可能是中间乳化剂的问题，另外可能是温度比较低。
我也经常提出DNA，是从动物组织中。开始的时候也出过一些问题，但我尽量能把每一步做到标准化，现在是基本没出过问题了。
我觉得你加入样品多少（磨完后在加CTAB前称一下样品），加多少CTAB，再加多少酚氯仿，最好都有一个比例。这样做虽然有点繁琐，但我觉得中间出了问题也好知道在哪里。
你也可以象楼上说的，加大离心速度。

除了提高转数还有没有别的办法？偶实验室的离心机最大5300rpm:mad::)

在材料研磨时要注意材料量，尽量作到研磨成粉状，用1.5ml离心管装时液氮粉的量不要超过0.5ml的线，建议多次离心抽提，适量提高转速，但也不要过高。

谢谢各位！

我觉得你的酚可能有问题,氧化了啊,我也出现过,换了酚就OK了!不知道对你有没有用!!;)

试剂的问题

我也遇到一样的问题，离了很多次还是很混浊，加大离心机转速也不行。后来样品变得越来越少:(。后来换了小离心管，多离心了几次，勉强提出了DNA.

加CTAB后充分混匀，试试

CTAB的质量,不同批次等影响是很大的

加大离心转速，我用过8000r，效果都不好，后来改到最大13000r，才好了

同意氧化的说法，我也遇到过这样的问题，但对结果的影响不是很大！

1 重新配置CTAB，其余药品也尽量换用新的
2 静置10分钟后，用12000rpm离心10-15分钟，

不要用冰浴，尤其是加了苯酚氯仿以后试看以下

中间层出现浑浊是因为含有蛋白的缘故。在保证药品没有氧化变质的前提下。如果多次抽题都有沉淀的话，第一，可能你的样品量太多，而消化蛋白的药品不够。第二，研磨不够彻底，一定要磨细，要用力。  注意一下这两点 ，应该没错。不要贪多 ，多了反而裂解不充分，dna 无法释放出来。

我觉得是样品没有磨碎

买个小量提取试剂盒不很好吗？

转速太小了

如果之前加入SDS的话，抽提时要在常温下进行，不然就会出现白色混浊。

1.采用冷冻离心
2.采用高转速,以及处长离心时间

每管加样少一些，提高离心转速到10000左右

药品的问题

5000多转的速度能提DNA吗？

换个方法吧，我用kI法提取dna ，觉得挺好，比试剂盒快

转速过低   建议借别人的离心机试试
树叶是不是太老了 用嫩点的  磨碎点

呵呵  我也不是很清楚   参考

没有混匀也会出现这个问题

我提苹果叶片和根中时转速都是12000rpm，没有出现过离心后由混浊的问题。

大家好，我是一个研一的学生，是学分子生物学方面的，因为现在跟导师接触比较少，现在很迷茫，方向跟RNA有关，真的不知道对于试验方面我应该怎样准备？或者是看什么文献？向各位前辈请教。

顺便请教您你一问题： 梨树叶子里面含有石细胞吗？ 如果有，是否会影响到DNA的提取质量？  请赐教！谢谢

还有一个可能，就是样品中盐分过高，也会导致离心不分层，但不知道你的样品是否会有这样的问题。

我也怀疑你的酚有问题,还是你吸酚的时候没有深入到下层吧