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【推荐】【转载】实验室常用染色液和试剂配方【很全】

作者: jhu132llh (站内联系TA)    发布: 2010-11-17
实验室常用染色液配方
1、吕氏(Loeffler)美蓝染色液
A液:美蓝(Methylene blue) 0.3 克95%酒精 毫升
B液:氢氧化钾(KOH) 0.01 克蒸馏水 100 毫升分别配制A液和B液,然后混合即成。
2、齐氏(Ziehl)石炭酸复红染色液
A液:碱性复红(Basic fuchsin) 0.3 克95%酒精 10.O 毫升
B液:石炭酸(苯酚) 5.0 克蒸馏水 95 毫升
将碱性复红溶于95%酒精中,配成A液。将石炭酸溶于蒸馏水中,配成B液。将两者混合即成。
3、结晶紫染色液(Huclker改订)A液:结晶紫(Crystai violet) 2.5 克95%酒精 25.0 毫升
B液:草酸铵(NH4)2C2O4H2O 1.0 克蒸馏水 100 毫升
将结晶紫研细后,加入95%酒精,使之溶解,配成A液。将草酸铵溶于蒸馏水,配成B液。两液混合即成。
4、路戈氏(LugoI)碘液(革氏鉴别染色用)碘 1.0克碘化钾 2.0克蒸馏水 300毫升
先将碘化钾溶于少量蒸馏水中,再将碘溶于碘化钾溶液中,溶时可稍加热,最后加足蒸馏水量。
5、番红染色液(革氏鉴别染色用)番红O(Safranin O) 2.0克 蒸馏水 100毫升
6、孔雀绿染色液(芽孢染色用)孔雀绿(Malachite green) 5.0克蒸馏水 100毫升先将孔雀绿研细,加少许95%酒精溶解,再加蒸馏水。
7、Dorner黑素液(英膜染色用)黑素(Nigrosin) 10.0克蒸馏水 100毫升福尔马林(40%甲醛) 0.5毫升将黑素在蒸馏水中煮沸5分钟,加入福尔马林作为防腐剂,用玻璃棉过滤。
8、刚果红染色液刚果红(Congo red) 2.0克蒸馏水 100毫升
9、稀释结晶紫染液(放线菌染色用)结晶紫染色液(同3) 5.0毫升蒸馏水 95.0
10、乳酸石碳酸棉蓝染色液(真菌制片,短期保存)石炭酸 10.0克 甘油 20.0毫升乳酸(比重l.21) 10.0毫升 棉蓝 0.02克蒸馏水 10.0毫升将碳酸加在蒸溜水中加热溶化,加入乳酸和甘油,最后加入棉蓝,溶解即成。
11动物组织石蜡切片染色方法
苏木精-伊红(HE)染色:二甲苯Ⅰ, Ⅱ各10 min,依次进入无水乙醇、950 mL/L, 900 mL/L, 800 mL/L及700 mL/L的酒精各5 min,蒸馏水洗;入苏木精染液10 min,盐酸酒精分色4 s,自来水洗10 min;依次入700 mL/L, 800 mL/L及900 mL/L酒精各5 min,入伊红染液染色10 min;入950 mL/L及无水乙醇Ⅰ, Ⅱ各5 min, 以二甲苯透明,中性树脂封片.
一、常用染色液的配制
⒈ 碘-碘化钾(I2-KI)溶液 能将淀粉染成蓝紫色,蛋白质染成黄色,也是植物组织化学测定的重要试剂。
配方:碘化钾2g ; 蒸馏水300ml ; 碘1g
先将碘化钾溶于少量蒸馏水中,待全溶解后再加碘,振荡溶解后稀释至300mL,保存在棕色玻璃瓶内。用时可将其稀释2-10倍,这样染色不致过深,效果更佳。
⒉ 苏丹Ⅲ(sudanⅢ或Ⅳ) 能使木栓化、角质化的细胞壁及脂肪、挥发油、树脂等染成红色或淡红色,是著名的脂肪染色剂。
配方:(1)苏丹III或苏丹Ⅳ干粉0.1g ; 95%酒精10ml ; 过滤后再加入10ml甘油
(2)先将0.1g苏丹III或IV溶解在50ml丙酮中,再加入70%酒精50ml。
(3)苏丹III 70%乙醇的饱和溶液。
⒊ 1%醋酸洋红(aceto carmine) 酸性染料,适用于压碎涂抹制片,能使染色体染成深红色,细胞质成浅红色。
配方:洋红1g ; 45%醋酸100ml
煮沸2h左右,并随时注意补充加入蒸馏水到原含量,然后冷却过滤,加入4%铁明矾溶液1~2滴(不能多加,否则会发生沉淀),放入棕色瓶中备用。
⒋ 改良苯芬品红染色液(Carbol fuchsine) 核染色剂。
配制步骤: 先配成三种原液,再配成染色液。
原液A:3g碱性品红溶于100ml 70%酒精中。
原液B:取原液A10ml加入到90ml 5%石炭酸水溶液中。
原液C:取原液B 55ml,加入6ml冰醋酸和6ml福尔马林(38%的甲醛)。
(原液A和原液C可长期保存,原液B限两周内使用)
染色液:取C液10~20ml,加45%冰醋酸80~90ml,再加山梨醇1~1.8g,配成10%~20%浓度的石炭酸品红液,放置两周后使用,效果显著(若立即用,则着色能力差)。
适用范围:适用于植物组织压片法和涂片法,染色体着色深,保存性好,使用2~3年不变质。山梨醇为助渗剂,兼有稳定染色液的作用,假如没有山梨醇也能染色,但效果较差。
⒌ 中性红(neutral red)溶液 用于染细胞中的液泡,可鉴定细胞死活。
配方:中性红0.1g ; 蒸馏水100ml
使用时再稀释10倍左右。
⒍ 曙红Y(伊红,eosin Y)酒精溶液 常与苏木精对染,能使细胞质染成浅红色,起衬染作用。
配方:曙红0.25g ; 95%酒清100ml
也常用于95%酒精脱水时,加入少量曙红溶液,其目的是在包埋、切片、展片、镜检时便于识别材料。
⒎ 钌红(ruthenium red)染液 钌红是细胞胞间层专性染料,其配后不易保存,应现用现配。
配方:钌红5~10mg ; 蒸馏水25-50ml
⒏ 龙胆紫(gentian violet) 为酸性染料,适用于细菌涂抹制片。
配方:龙胆紫0.2~1 g ; 蒸馏水100ml
⒐ 苯胺兰(aniline blue)溶液 为酸性染料,对纤维素细胞壁、非染色质的结构、鞭毛等,尤其是染丝状藻类效果好。还多用于与真曙红作双重染色,对于高等植物多用于与番红作双重染色。
配方:苯胺兰1 g ; 35%或95%酒精100ml
⒑ 间苯三酚(phloroglucin)溶液 用于测定木质素。
配方:间苯三酚5g ; 95%酒精100ml
注:此溶液呈黄褐色即失效。
⒒ 橘红G(orange G)酒精溶液 为酸性染料,染细胞质,常作二重或三重染色用。
配方:橘红G 1g ; 95%酒精100ml
⒓ 番红(safranin O) 为碱性染料,适用于染木化、角化、栓化的细胞壁,对细胞核中染色质、染色体和花粉外壁等都可染成鲜艳的红色。并能与固绿、苯胺兰等作双重染色,与橘红G、结晶紫作三重染色。
配方:(1)番红水溶液 番红0.1或1 g ;蒸馏水100ml
(2)番红酒精溶液 番红0.5或1 g ;50%(或95%)酒精100ml
(3)苯胺番红酒精染色液
甲液 番红5 g +95%酒精50ml
乙液 苯胺油20ml +蒸馏水450ml
将甲、乙二溶液混合后充分摇均匀,过滤后使用。
⒔ 固绿(fast green) 又称快绿溶液。为酸性染料,能将细胞质,纤维素细胞壁染成鲜艳绿色,着色很快,故要很好的掌握着色时间。
配方:(1)固绿酒精液 固绿0.1 g ; 95%酒精100ml
(2)苯胺固绿酒精液 固绿 1 g ;无水酒精 100ml ;苯胺油 4ml
配后充分摇匀,过滤后使用。现配现用效果好。
⒕ 苏木精(hematoxylin)染液 苏木精是植物组织制片中应用最广的染料,是苏木科植物苏木的心材提取出来的。它是很强的细胞核染料,而且可以分化出不同颜色。配方很多,现举海登汉氏(Heidenhain's)苏木精染色液,又称铁矾苏木精染色液。
配方:甲液(媒染剂): 硫酸铁铵(铁明矾)2-4g ;蒸馏水100ml
(必须保持新鲜,最好临用之前配制)
乙液(染色剂):苏木精 0.5-1g ;95%酒精 10ml;蒸馏水 90ml
配制步骤:(1)将苏木精溶于酒精中,瓶口用双层纱布包扎,使其充分氧化(通常在室内放置两个月后方可使用)。(2)加入蒸馏水,塞紧瓶口,置冰箱中可长期保存。
切片需先经甲液媒染,并充分水洗后才能以乙液染色,染色后经水稍洗再用另一瓶甲液分色至适度。
铁矾苏木精染液为细胞学上染细胞核内染色质最好的染色剂,但要注意甲液与乙液在任何情况下决不能混合。
⒖亚甲基蓝染液 常用于细菌、活体细胞等的染色。
取0.1g亚甲基蓝,溶于100ml蒸馏水中即成。
⒗詹纳斯绿B(Janus green B)染液
将5.18gJanus 绿溶于100ml蒸馏水,配成饱和水溶液。用时需稀释。稀释的倍数应视材料不同而异。
⒘硫堇染液
取0.25克硫堇(也称劳氏青莲或劳氏紫)粉末,溶于100ml蒸馏水中,即可使用。使用此液时,需要用微碱性自来水封片或用1%NaHCO3水溶液封片,能成多色反应。
18.黑色素液
水溶性黑素10g,蒸馏水100mL,甲醛(福尔马林)0.5mL。可用作荚膜的背景染色。
19.墨汁染色液 国产绘图墨汁40mL,甘油2mL,液体石炭酸2mL。先将墨汁用多层纱布过滤,加甘油混匀后,水浴加热,再加石炭酸搅匀,冷却后备用。用作荚膜的背景染色。
20.吕氏(Loeffier)美蓝染色液
A液:美蓝(methylene blue,又名甲烯蓝)0.3g,95%乙醇30mL;
B液:0.01%KOH100mL。
混合A液和B液即成,用于细菌单染色,可长期保存。根据需要可配制成稀释美蓝液,按1∶10或1∶100稀释均可。
21.革兰氏染色液
(1)结晶紫(cristal violet)液:结晶紫乙醇饱和液(结晶紫2g溶于20mL95%乙醇中)20mL,1%草酸铵水溶液80mL。将两液混匀置24h后过滤即成。此液不易保存,如有沉淀出现,需重新配制。
(2)芦戈(Lugol)氏碘液:碘1g,KI 2g,蒸馏水300mL。先将KI溶于少量蒸馏水中,然后加入碘使之完全溶解,再加蒸馏水至300mL,即成。配成后贮于棕色瓶内备用,如变为浅黄色 能使用。
(3)95%乙醇:用于脱色,脱色后可选用以下(4)或(5)的其中一项复染即可。
(4)稀释石炭酸复红溶液:碱性复红乙醇饱液(碱性复红1g,95%乙醇10mL,5%石炭酸90mL)10mL,加蒸馏水90mL。
(5)番红溶液:番红O(safranine O,又称沙黄O)2.5g,95%乙醇100mL,溶解后可贮存于密闭的棕色瓶中,用时取20mL与80mL蒸馏水混匀即可。
以上染色液配合使用,可区分出革兰氏染色阳性(G+ )或阴性(G- )细菌,前者蓝紫色,后者淡红色。
22.齐氏(Ziehl)石炭酸复红液:碱性复红0.3g溶于95%乙醇10mL中为A液;0.01%KOH溶液100mL为B液。混合A、B液即成。
23.姬姆萨(Giemsa)染液
(1)贮存液:称取姬姆萨粉0.5g,甘油33mL,甲醇33mL。先将姬姆萨粉研细,再逐滴加入甘油,继续研磨,最后加入甲醇,在56℃放置1-24h后即可使用。
(2)应用液(临用时配制):取1mL贮存液加19mLpH7.4磷酸缓冲液即成。也可以贮存液∶甲醇=1∶4的比例配制成染色液。
24. 1%瑞氏(Wright's)染色液
称取瑞氏染色粉6g,放研钵内磨细,不断滴加甲醇(共600mL)并继续研磨使溶解。经过滤后染液须贮存一年以上才可使用,保存时间愈久,则染色色泽愈佳。
二、常用试剂的配制
(一)显微镜镜头清洁剂
将乙醚和乙醇按7∶3混合,装入滴瓶备用。用于擦拭显微镜镜头上油迹和污垢等(注意瓶口必须塞紧,以免挥发)。
(二)固定液
1.福尔马林-乙酸-酒精固定液(FAA,又称万能固定剂)
福尔马林(38%甲醛)5ml+冰乙酸5ml+70%酒精90 ml,可用于固定植物的一般组织,但不适用于单细胞及丝状藻类。幼嫩材料用50%酒精代替70%酒精,可防止材料收缩;还可加入5ml甘油(丙三醇)以防蒸发和材料变硬。FAA 可兼作保存剂。
2.福尔马林-丙酸-酒精固定液(FPA)
福尔马林5ml+丙酸5ml+70%酒精90ml,用于固定一般的植物材料,通常固定24h,效果比FAA 好,并可长期保存。
3.福尔马林-丙酸-氯仿固定液(卡诺固定液)
配方一:无水酒精3份+冰乙酸1份。
配方二:无水酒精6份+冰乙酸1份+氯仿3份。
是研究植物细胞分裂和染色的优良固定液,材料固定后,用95%和85%的酒精浸洗,清洗2-3次,也可转入70%酒精中保存备用。
4.甘油-酒精软化剂
甘油1份+50%或70%酒精1份,适用于木材的软化,将木质化根、茎等材料排除空气后浸入软化液中,时间至少一周或更长一些,也可将材料保存于其中备用。
5. 铬酸-乙酸固定液
根据固定对象的不同,可分强、中、弱3种不同的配方:
弱液配方:10%铬酸2.5 ml+10%乙酸5.0 ml+蒸馏水92.5ml。
中液配方:10%铬酸7 ml+10%乙酸10 ml+蒸馏水83 ml。
强液配方:10%铬酸10 ml+10%乙酸30 ml+蒸馏水60 m1。
弱液用于固定较柔嫩的材料,例如藻类、真菌类、苔药植物和蕨类的原叶体等,固定时间较短,一般为数小时,最长可固定12-24 h,但藻类和蕨类的原叶体可缩短到几分钟到1h。
中液用作固定根尖、茎尖、小的子房和胚珠等,固定时间12-24 h或更长。
强液适用于木质的根、茎和坚韧的叶子、成熟的子房等。为了易于渗透,可在中液和强液中另加入2%的麦芽糖或尿素。固定时间12-24 h或更长。
(三)离析液
1. 铬酸-硝酸离析液
铬酸为三氧化铬的水溶液:(1) 10 ml铬酸;(2) 10 ml浓硝酸。
将上述两液等量混合均匀后再使用。适于对导管、管胞、纤维等木质化的组织进行解离时使用。
2. 盐酸-酒精固定离析液
将浓盐酸、95%酒精等量混合备用,一般用于离析根尖细胞。
(四)解离液
常用于根尖等细胞的涂片,它能使细胞壁中层(果胶质)溶解,而使细胞分开。
1.盐酸酒精
配方:95%酒精 1份,浓盐酸1份。二者混合即成。
2.盐酸溶液
(1)1 mol/L盐酸
配方:浓盐酸(比重1.19) 82.5ml
用蒸馏水定容 1 000ml
(2)0.2mol/L盐酸
配方:浓盐酸(比重1.19) 16.5ml
用蒸馏水定容 1 000m1
盐酸水解时间对染色效果影响很大,水解时间短,易着色但较难压片;水解时间长,染色慢而色淡;超过20min或水解温度过高,往往染色极淡,或染不上色。各种材料最合适的时间有差别,一般来说,大染色体材料水解时间可较长,小染色体材料宜短。
改用0.2mol/L盐酸于60℃恒温下水解10~15min,对各种类型材料都能获得细胞分离和染色合适的较好效果。
(五)预处理液
用于根尖压片的前处理,能使细胞有丝分裂染色体缩短。
1.0.002mol/L 8-羟基奎林水溶液 称取0.29g 8-羟基奎林溶于1 000ml蒸馏水中。
2.对二氯代苯饱和水溶液 将对二氯代苯加入蒸馏水中搅拌至不再溶解为止,即成饱和水溶液。
(六)各级酒精的配制
由于无水乙醇价格较高,故常用95%的酒精配制。配制方法很简便,用95%的酒精加上一定量的蒸馏水即可。可按下列公式推算:
(原酒精浓度值(95%)-最终酒精浓度值)×100=所需加水量
最终酒精浓度 95%酒精用量 蒸馏水量
85% 85ml 10ml
70% 70ml 25ml
50% 50ml 45ml
30% 30ml 65ml
(七)其他试剂
1. 0.7%生理盐水 取NaCl 0.7g溶于100mL蒸馏水中。用于两栖类动物。
2. 1%硝酸银溶液 称取1克硝酸银,溶于100毫升蒸馏水中即可。
3.碘酒
取碘2g和KI 1.5g,先加入少量的75%乙醇搅拌,待溶解后再用75%乙醇稀释至100mL
4. 树胶封固剂
将固体的加拿大树胶块,溶解于二甲苯或正丁醇中,浓度要适当(注意绝对不能混入水或酒精),是玻片标本好的封固剂。也可用人工合成的中性树胶代替。
5. 明胶粘贴剂
明胶1-2 g+石碳酸(苯酚)2g+蒸馏水100ml+甘油15ml。
配法:先将蒸馏水加温至30-40℃,慢慢加入明胶,待全部溶解后,再加入2g苯酚和15ml甘油,搅拌至全溶为止,然后用纱布过滤,滤液贮于瓶中备用。
6.标本消毒剂
用于腊叶标本消毒,常用0.4%~1%升汞酒精溶液(95%酒精1 000ml+4 g升汞),浸泡标本0.5~2min。升汞有剧毒,不要弄到手上,消毒后注意洗手。
·
哎呀
好长呀
编辑了好一阵
还是不太好
大家见谅一下
路过,楼主辛苦了!:tiger05:
楼主辛苦了,对于刚进实验室的人真的很有帮助啊
楼主很有心,谢谢分享
:tiger28::tiger28::tiger28:
Five stars!
:)一直在找,谢谢咯
楼主辛苦了 非常感谢
楼主辛苦了,谢谢楼主!
应该鼓励一下!
:tuzi3:谢谢分享
辛苦了,:tiger32:
楼主辛苦~:tuzi6:
我觉得你可以把它们做成PDF上传到附件:tiger28:
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很不错的资料!
Originally posted by 最爱花诗雨 at 2011-04-25 20:44:02:
我觉得你可以把它们做成PDF上传到附件:tiger28:
嘿嘿
懒得做
大家凑合看看吧
楼主,建议你将这些材料做成word或者PDF 这样至少酬劳会多一些。
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